Sysmex XN系列血液分析系统-红细胞篇 （RET通道）

       网织红细胞是红细胞的未成熟阶段，是反映骨髓红系造血功能以及判断贫血和相关疾病疗效的重要指标。骨髓中红细胞系统的增生发育过程是：多能干细胞→单能干细胞→原始红细胞→早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞。从原始红细胞增殖到晚幼红细胞阶段共分裂3－4次，约需72小时，红细胞数由一个变为8一16个，细胞核由大变小而浓缩，胞浆中含血红蛋白逐渐增多。晚幼红细胞以后细胞即不再分裂，发育过程中核被排出而成为网织红细胞。网织红细胞含有少量核糖核酸RNA)，用煌焦油蓝染色时成网状故名网织红细胞。网织红细胞进一步成熟，RNA消失而为成熟红细胞。从晚幼红细胞发育到成熟红细胞约需48小时，成熟红细胞的寿命约为120天。在正常情况下骨髓中有核红细胞并不释放至血循环，只有网织红细胞和成熟红细胞才释入血中。因此，检查末梢血中网织红细胞数，可以推知骨髓生红细胞的情况。过去，计数网织红细胞十分繁琐、费时且不易准确。现在，Sysmex血液分析系统具有自动检测网织红细胞的功能。仪器计数网织红细胞操作方便，且计数的细胞多，故很准确。Sysmex血液分析系统对网织红细胞可提供6个参数，包括网织红细胞总数（Ret#）、网织红细胞百分比（Ret%）、高荧光强度网织红细胞含量（HFR）、中荧光强度网织红细胞含量（MFR）、低荧光强度网织红细胞含量（LFR）、网织红细胞血红蛋白含量（RET-He），其中意义最大的，除了总数、百分比以外，最重要的网织红细胞血红蛋白含量（RET-He）参数。正常人外周血中甚少，如增加，表示红系统增生（如急性溶血，多数溶血性贫血和其他增生性贫血），如贫血仍不见增生，可能是重型再障。抗贫血治疗后明显上升，表示治疗有效，反之效果欠佳。故网红的总数或百分比对贫血的临床诊断及疗效观察非常有价值。是血液最常做的项目之一。

       在RET通道， 使用荧光染料将未成熟红细胞中的大量残存核酸染色，用流式细胞术的原理进行检测。被荧光染色的网织红细胞根据荧光强度的强弱分类为四部分：HFR（高荧光强度网织红细胞比率）、MFR（中荧光强度网织红细胞比率）、LFR（低荧光强度网织红细胞比率）、RBC（红细胞）。分类为HFR、MFR、LFR的红细胞称为网织红细胞，特别是分类为HFR、MFR的网织红细胞作为IRF（未成熟网织红细胞指数）计数。另外，分类为RBC的红细胞作为成熟红细胞计数。

CD71阳性细胞和网织红细胞

利用比重离心法从健康人外周血获得网织红细胞增加的血液，将该血液与磁珠标记的CD71抗体进行抗原抗体反应，再通过超强磁场的作用，分选出CD71阳性网织红细胞（磁珠法）。我们对分离前的网织红细胞增多的血液和分离后的CD71阳性细胞，用流式细胞仪进行分析，观察了新亚甲蓝及Fluorocell™ RET的染色情况。

流式细胞仪分析

网织红细胞增多的血液中，细胞分布在RBC、LFR、MFR、HFR的分布区域中。在网织红细胞增多的血液里，将表达CD71抗原的细胞用磁珠法回收，对回收液用流式细胞仪分析后发现，这些细胞在RET散点图中分布在相当于HFR的分布区域中。

新亚甲蓝染色
对于网织红细胞增多的血液，按Heilmeyer（海尔梅耶）分型的各阶段细胞混在一起。在用磁珠法分离的网织红细胞（CD71阳性网织红细胞）中，大量观察到较Heilmeyer分型I、 II、 II型I更幼稚的网织红细胞。由此可以认为分类在HFR上的网织红细胞主要是CD71阳性细胞，是Heilmeyer分型III型以上的更幼稚的网织红细胞。

Fluorocel RET染色

使用激光共聚焦显微镜观察了网织红细胞的Fluorocell RET染色图像。在网织红细胞增多的血液中，被Fluorocell RET浓染的细胞很少，但在用磁珠法分离的网织红细胞（CD71阳性网织红细胞）中，多数细胞被浓染。在激光共聚焦显微镜下的图像数据很好地反映了流式细胞仪分析的散点图。

网织红细胞的电子显微镜图像
将网织红细胞的CD71抗原用胶体金标记，使用两种电子显微镜实施了观察。扫描电子显微镜是观察细胞表面结构的显微镜，透射电子显微镜是要将细胞切成圆片来观察内部结构的显微镜。附着胶体金的CD71阳性网织红细胞在扫描电子显微镜下可确认其复杂的表面结构，用透射电子显微镜确认了细胞内部残留线粒体和小细胞器。这是网织红细胞的特征性形态。
另一方面，CD71阴性红细胞呈扁平状，几乎无内部结构，呈现接近成熟红细胞的形态。

网织红细胞检测散点图和细胞图像

被Fluorocell RET浓染且在RET散点图上分类在HFR分布区域的细胞是CD71阳性网织红细
胞， 其内部结构多数可见， 呈现典型的网织红细胞的形态。 在RET散点图上被分类在MFR、 LFR分布区域的网织红细胞， 被Fluorocell RET淡染，可能是CD71阴性细胞， 用电子显微镜观察也是呈现接近成熟的形态。此次研究明确了网织红细胞的形态和CD71表达的关系。 另外， 确认了RET散点图可以很好地反映网织红细胞的成熟度。

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